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淫羊藿苷對小鼠卵泡卵母細胞體外發育與成熟的影響

徐亞萍,陳佳慧,劉萌萌,沈清霞,劉雨晴,許藝凡,芮榮*
(南京農業大學動物醫學院,江蘇/南京/210095)

  摘要:用在體和離體試驗研究淫羊藿苷對小鼠卵母細胞體外發育與成熟的影響。健康雌性小鼠分組灌服○˙一、○˙三、○˙五和○˙七mg/d淫羊藿苷或二、六、十及十四mg/d淫羊藿水提液,並設生理鹽水灌服對照組,取連續灌服七天和十四天小鼠卵巢卵泡卵母細胞作體外成熟培養與體外受精,統計第一極體(phI)排出率和受精率。在小鼠卵母細胞體外成熟培養液中按高(5μg/mL)、中(0.5μg/mL)、低(0.05μg/mL)劑量添加淫羊藿苷,經廿四小時成熟培養後進行體外受精,觀察並記錄卵母細胞phI排出、受精和卵裂情況。結果表明,分別連續灌服淫羊藿苷和淫羊藿水提液後,各組小鼠卵母細胞體外成熟率均有所提高,連續灌臤七天後,淫羊藿苷○˙三、○˙五和○˙七mg/d組小鼠卵母細胞受精率較對照組顯著提高(P<0.01)連續灌服十四天淫羊藿水提液六mg/d組卵母細胞phI排出率和受精率均顯著高於對照組(P<0.05)。添加淫羊藿苷低劑量組小鼠卵母細胞體外受精率和卵裂率顯著高於對照組(P<0.05);phI排出率雖高於對照組,但無顯著差異。本試驗表明,連續灌服淫羊藿苷七天對小鼠卵母細胞體外發育與成熟具有明顯的促進作用;體外培養液中添加低劑量淫羊藿苷對小鼠卵母細胞體外成熟和受精具有促進作用,但高劑量反而有抑制作用。
  關鍵詞:小鼠;淫羊藿苷;卵母細胞;體外成熟
  中圖分類號:Q492.5  文獻標誌碼:A  文章編號:0529-5130(2016)05-0105-03

  淫羊藿是傳統中醫補腎壯陽藥物,現代研究表明淫羊藿具有抑制微生物、抗衰老、促進骨細胞生長、抑制腫瘤等藥理功(1)。淫羊藿苷(ICA)是淫羊藿主要藥效成分之一,為黃酮類提取物(2);在結構上屬於8-八異戊烯基黃酮醇苷類化合物。淫羊藿苷與大鼠卵泡顆粒細胞共孵育三小時後,可刺激顆粒細胞分泌雌二醇(3)。藥理學試驗表明,淫羊藿提取液及其有效成分淫羊藿苷均具有植物雌激素樣作用(4);具有調節內分泌,緩解婦女更年期症狀等多種生理活性(5)。王靜等(6)研究淫羊藿苷對卵巢摘除小鼠子宮的影響,發現它能改善卵巢摘除小鼠的子宮系數、子宮內膜厚度和子宮腺體直徑等。Chen等(7)認為,淫羊藿苷及其衍生物淫羊藿素和去甲淫羊藿素具有促MCF-7細胞和T47D細胞增殖的雌激素樣作用。目前,有關淫羊藿苷對卵母細胞發育和成熟的研究相對較少。本試驗通過體內灌服和體外給藥2二種途徑,研究淫羊藿苷對小鼠卵母細胞體外發育與成熟的影響,以期了解淫羊藿苷對小鼠卵母細胞體外成熟發育的作用,為進一步研究淫羊藿苷影響小鼠卵母細胞發育和成熟的機理奠定基礎。

一、材料與方法
 1.試驗動物和藥物準備
  四周齡清潔級健康雌性昆明小鼠,體重廿~廿五公克,購自揚州大學比較醫學中心,許可證號SCIXK(蘇)2011-002。淫羊藿原藥購自南京市金陵藥店;淫羊藿水提液製備時,取生藥五○○公克加八倍水,煮沸一小時紗布過濾,重複三次,合併濾液,煮沸濃縮至五○○mL,使1mL水提液含一公克生藥(1g/mL),置四℃冰箱保存備用。淫羊藿苷購自南京澤朗醫藥科技有限公司,純度為九十八%(批號89327)。
 2.飼養管理
  供試小鼠適應性飼養一周後隨機分為淫羊藿水提液組、淫羊藿苷組和對照組(生理鹽水)。二個試驗組又按灌服劑量各分為四個組,每組十二隻小鼠,結合文獻報導設定濃度分別為淫羊藿水提液二、六、十、十四mg/d、淫羊藿苷○˙一、○˙三、○˙五、○˙七mg/d。每天各組的灌服時間均在下午七時~七時卅分。小鼠正常採食、自然光照,觀察生長發育情況。
 3.權品採集與處理
  連續給藥七天後各組取六隻小鼠以頸椎脫臼法致死,各組剩餘六隻小鼠與給藥十四天後致死。打開腹腔,取雙側卵巢並分離脂肪組織和系膜等,用M16培養液洗二次後置於培養液中搗碎並收集卵母細胞,放入M16培養液中培養。正常小鼠經適應性飼養一周後,腹腔注射PMSG (20U)廿四小時後頸椎脫臼法致死,與上述同樣方法取卵母細胞置於添加淫羊藿苷濃度分別為○、○˙○五、○˙五和五μg/mL的M16培養液中培養。培養條件為卅七℃、五%CO2和飽和濕度,經廿四小時培養後觀察記錄第一極體(phI)排出情況,並在HTF液中進行體外受精,在CO2培養箱內孵育六小時後,觀察記錄原核形成與受精、卵裂情況。
    (詳細內容請參閱2017年5月號現代養豬第117頁)